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    實驗簡介買此服務

    雙熒光素酶報告基因實驗原理


    熒光素底物在熒光素酶作用下會發光,且光強度能反應熒光素酶的蛋白表達量。而熒光素酶的蛋白表達量,又和啟動子活性、mRNA的穩定性及翻譯效率等有關。利用這個特點,將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達,再檢測其發光強度,就能判斷這些序列對蛋白表達的影響。這就叫熒光素酶報告基因檢測。
    為了減少實驗誤差,一般會同時轉染一個能穩定表達熒光素酶的質粒作為內參,所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。


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    雙熒光素酶報告基因實驗流程


    雙熒光素酶報告基因實驗技術服務_啟動子活性檢測實驗.jpg

    圖一:啟動子活性分析示意圖


    啟動子與轉錄因子結合驗證外包服務_轉錄因子驗證_雙熒光素酶檢測.jpg

    圖二:啟動子和轉錄因子互作分析示意圖





    應用領域



    coip技術服務.bmp





    雙熒光素酶技術實驗應用背景


    雙熒光素酶報告基因分析通常以螢火蟲熒光素酶為報告基因,以海腎熒光素酶為內參基因。所構成的報告系統具有靈敏度高、動態范圍廣、應用靈活等優勢,廣泛應用于基因調控、非編碼RNA靶向互作等研究領域。


    輝駿生物根據以下兩種應用制定不同的實驗方案,可針對客戶情況提出合適的建議>>

    1. 檢測啟動子活性;

    2. 檢測轉錄因子與目標啟動子的相互作用。




    雙熒光素酶檢測啟動子活性研究案例—客戶文章解析



    封面.png


    P300/YY1/miR-500A-5p/HDAC2信號軸調節結直腸癌癌細胞增殖



    研究背景


    結直腸癌(CRC)是全球癌癥相關性死亡的主要原因之一,復發率和轉移率較高。闡明CRC發生和轉移的機制將有助于尋找新的診斷生物標志物和開發有效的治療干預措施。在過去的研究中已經發現了一些參與結直腸癌形成和發展的蛋白質編碼基因,然而,包括microRNA(MiRNA)在內的非編碼RNA的功能在很大程度上仍需進一步研究。



    研究路線

    1

    細胞和臨床樣本分析顯示miR-500a-5p在CRC中低表達且與其惡行發展有關

    2

    熒光素酶等實驗證明介導CRC細胞增殖的HDAC2是mR-500a-5p靶標

    3

    熒光素酶和ChIP-qPCR等實驗證明YY1可以結合miR-500a-5p啟動子并負調控其表達

    4

    Co-IP、ChIP等實驗表明miR-500a-5p水平還受到YY1/P300HDAC2復合體的調控

    5

    小鼠模型實驗確定miR-500a-5p表達可顯著抑制胂瘤發展



    研究結論


    本研究確定miR-500a-5p在結直腸癌組織中下調,miR-500a-5p水平受到YY1/p300/HDAC2轉錄復合體的協同調控。此外,miR-500a-5p還通過直接結合HDAC2的3’UTR來抑制結直腸癌細胞增殖和遷移。



    客戶文獻


    Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in human colorectal cancer. Nature Communications. 2019, IF=12.121.





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    1. 啟動子活性分析,用于檢測待測啟動子是否有活性及其活性區域;

    2. 啟動子與轉錄因子結合驗證,用于研究某轉錄因子是否調控某基因的待測啟動子,以及它們的結合區域。


    Luc(雙熒光素酶報告基因實驗)檢測服務
    服務項目服務內容結果交付實驗周期客戶提供價格
    啟動子活性分析合成和構建2kb啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告5-6周

    1、待測細胞及其培養方法

    2、實驗信息表

    (相關基因信息)


    點擊詢價


    構建截短啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
    細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告
    啟動子與轉錄因子結合驗證合成和構建野生型啟動子熒光素酶載體
    載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告5-6周

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    載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
    細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告


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    雙熒光素酶報告基因實驗*輝駿生物優勢

    1

    近十年服務經驗,眾多服務案例,服務成果得到優秀期刊認可

    2

    對啟動子、轉錄因子、miRNA影響熒光素酶表達的具體機制理解深刻,對DNA-蛋白互作方面有獨到見解,擅長針對客戶情況提出合適的方案建議

    3

    自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線

    4

    售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確??蛻舭残倪M行下游實驗及投稿




    Luc(雙熒光素酶報告基因)技術服務樣本要求


    1. 送樣要求


    樣本類型建議送樣量
    基因模板質粒約2ug,或甘油菌約100ul
    待測細胞

    (廣州市內客戶)可接受活細胞,2個T25瓶,細胞匯合度>80%;

    (其他地區客戶)凍存細胞2管。



    2. 樣本保存和運輸要求:


    (1)質?;蚋视途捎帽4孢\輸;

    (2)活細胞常溫取樣;

    (3)凍存細胞干冰取樣/運輸:需要至少在送樣前一天通知我方。

     




    雙熒光素酶檢測啟動子活性結果示例


    圖片.png


    圖片.png

    雙熒光素酶報告基因檢測圖





    雙熒光素酶檢測啟動子活性客戶文章


    1. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684.
    【研究內容】:本研究采用熒光素酶報告分析、pull down、ChIP、RIP等方法,研究了新型非編碼RNA(LncRNA)lnc-GD2H在促進C2C12成肌細胞增殖分化和肌肉再生中的作用。結果表明,在成肌細胞增殖和分化過程中,lnc-GD2H的表達增強,且在成肌細胞增殖過程中,lnc-GD2H促進了增殖標記基因的表達,并與c-Myc形成反饋環。在成肌細胞分化過程中,lnc-GD2H與NACA相互作用,減輕NACA對Myog的抑制作用,從而促進Myog的表達,促進分化。這些結果有助于理解lncRNAs調控成肌細胞增殖和分化的機制。
    使用相關技術: 啟動子與轉錄因子結合驗證,轉錄因子驗證,雙熒光素酶如何檢測


    2. Zhu J.Y. et al: Aryl Hydrocarbon Receptor Promotes IL-10 Expression in Inflammatory Macrophages Through Src-STAT3 Signaling Pathway. Frontiers in Immunology. 2018 , IF=4.716.

    【研究內容】:本研究首次大規模鑒定了家蠶絲腺中與絲素基因啟動子區域相互作用的蛋白質,包括絲素重鏈(Fibre H)、絲素輕鏈(FiBL)和一個25kD的多肽蛋白(P25)。通過DNA pull down結合質譜分析,從后絲腺中分別鑒定出198、292和247個或330、305和460個與FibH、FiBL和P25啟動子區域相互作用的蛋白質。此外,在M4和L5D5中分別鑒定出135個和212個蛋白是FibH、FiBL和P25的共同互作蛋白。其中鑒定出31個潛在的轉錄因子,如Y-box和PolyA結合蛋白,它們在核苷酸結合、ATP結合或蛋白質折疊中發揮作用。

    使用相關技術: Luc技術服務,啟動子活性分析檢測


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