TAP-MS串聯親和純化質譜實驗原理

過表達TST-Flag雙標簽融合蛋白的細胞，經裂解后先與Streptactin珠子孵育、初次洗滌及洗脫，釋放出蛋白復合物；再將此蛋白復合物與anti-Flag珠子結合、再次洗滌，最后的洗脫產物用質譜鑒定未知的互作蛋白。

輝駿生物已建立優質高效的TAP串聯親和純化平臺，并在該領域積累了10年豐富的經驗，實驗專家團隊可以根據客戶不同的項目需求進行定制化TAP-MS實驗。我們提供的平臺可用于蛋白質-蛋白質相互作用和蛋白質復合物研究，包括酵母、哺乳動物、果蠅、細菌和其他生物?？蛻?span style="vertical-align: inherit;">所獲得的數據可直接用于論文發表，一站式服務旨在為客戶節省時間和金錢。

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TAP-MS串聯親和純化質譜實驗流程

應用領域

TAP MS應用背景

TAP-MS實驗研究案例—客戶文章解析

鳥嘌呤核苷酸交換因子的差異rac1信號涉及FLII在調節rac1驅動的細胞遷移中的作用

研究背景

小的GTP酶 rac1與腫瘤的形成和擴散有關。當被鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)激活時，rac1與細胞中的各種蛋白質結合，從而調節各種功能，包括細胞遷移。然而，當在臨床環境中以rac1為靶點時，rac1的激活可以導致相反的遷移表型，增加了加劇腫瘤進展的可能性。這就需要確定影響rac1驅動的細胞運動的因素。

研究路線

研究結論

研究證實P-Rex1不僅能激活rac1，而且還能將蛋白質(如FLII)定向到rac1的活性形式，以介導特定的細胞功能，包括細胞收縮，從而使P-Rex1能夠促進細胞遷移。因此，這項研究提供了對以前未報道的P-REx1-rac1介導細胞遷移的細胞功能的洞察力，并強調了P-Rex1和rac1可能驅動癌癥擴散的其他模式。

客戶文獻

Hadir Marei. et al: Differential Rac1 signalling by guanine nucleotideexchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration.Nat Communications. 2016，IF=14.919.

蛋白組/代謝組實驗

? iTRAQ 定量蛋白質組學

? Label Free 實驗檢測服務

? LC-MS/MS 蛋白質譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質
? 廣泛靶向代謝組學

蛋白/核酸相互作用實驗

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯親和純化

分子細胞生物學實驗

? 基因調取/合成 (cDNA克隆)

?熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構建實驗服務

?miRNA靶基因驗證
? 慢病毒包裝

科研產品

? 哺乳動物細胞表達載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務

? 單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達服務

? 重組抗體表達

實驗試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實力

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輝駿生物提供的TAP（串聯親和純化）服務采用flag標簽和TST標簽進行串聯純化，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

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TAP串聯親和純化服務優勢*輝駿生物

TAP-MS實驗樣本要求

1. 送樣量要求

▲注意：如果客戶提供初始細胞株，需要同時提供詳細的細胞培養方法，廣州市內客戶可提供復蘇后的細胞，其他地區客戶請提供凍存細胞。

2. 樣本保存和運輸要求：

（1）如果客戶自行準備穩轉株，細胞沉淀用PBS清洗干凈后，離心去掉液體，先放入液氮中速凍，再轉移至-80℃冰箱中保存；

（2）樣本一定要做好標記，應用油性防凍記號筆或標簽紙在管上注明樣本名稱或編號；

（3）樣本較多或需要分批做，要將樣本分裝；

（4）干冰取樣/運輸；需要至少在送樣前一天通知我方。

串聯親和純化TAP技術實驗結果示例

TAP MS：Western blot檢測圖

TAP MS：質譜檢索表格（部分展示）

TAP MS客戶文章

1. Reinaldo F.M. et al: Destabilizing NEK2 overcomes resistance to proteasome inhibition in multiple myeloma. The Journal of Clinical Investigation.2020 , IF=11.864. 【研究內容】：每個骨髓瘤患者都有多個亞克隆，具有高或低染色體不穩定性(CIN)特征的多個亞克隆共存會導致異質性和耐藥性，導致疾病復發。作者通過串聯親和純化質譜(TAP-MS)技術，發現了CIN基因NEK2與脫泛素酶USP7結合。該結合阻止了NEK2泛素化并使其穩定。研究發現，使用NEK2或USP7抑制劑進行靶向治療可能是骨髓瘤最有效的輔助治療方法。 使用技術：串聯親和純化質譜、TAP-MS實驗外包

2.  Li X.et al: Proteomic analyses reveal distinct chromatin-associated and soluble transcription factor complexes.Molecular Systems Biology.2015 ,  IF=8.991. 【研究內容】：轉錄因子(TF)是細胞信號通路的終極靶標和執行者。在這項研究中，作者對56個TF的可溶性和染色相關復合物進行了蛋白質組學分析，利用串聯親和純化和質譜(TAP/MS)技術進行純化，并鑒定其中的蛋白質-蛋白質相互作用。研究為大量的TF提供了有價值的蛋白質-蛋白質相互作用網絡資源，強調了TF形成不同位置特異性的蛋白質復合物的一般原理，這些復合物與TF的不同調控和不同功能有關。 使用技術：TAP MS技術服務、串聯親和純化-質譜、串聯親和純化實驗怎么做

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Flag-TST雙標簽免疫沉淀/免疫共沉淀試劑盒

Flag-TST雙標簽免疫沉淀/免疫共沉淀試劑盒產品簡介

輝駿生物的Flag-TST雙標簽免疫沉淀/免疫共沉淀試劑盒能夠高效完成單標簽或雙標簽融合蛋白的純化及其互作蛋白的調取。以雙標簽融合蛋白做TAP為例，將Flag標簽、TST標簽與目標蛋白在目的細胞中融合表達，分別采用TST樹脂和Flag樹脂進行兩步串聯的親和純化，最終獲得目標蛋白及其互作蛋白復合物。

FLAG-tag 是一段由8個氨基酸殘基組成，N-DYKDDDDK-C (1012 Da)，其作用是標記蛋白。在蛋白表達和定位研究中，可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列連接起來，可以連接在目的蛋白的C端或N端，然后將整合后的基因轉入細胞中或胚胎干細胞亦或受精卵中。 TST標簽是strep-tagⅡ（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）的升級版，由兩個strep-tagⅡ外加連接臂組成，與融合蛋白結合能力更強，結合位點更多，其作用是標記蛋白。在蛋白表達和定位研究中，可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和TST-tag基因序列連接起來，可以連接在目的蛋白的C端或N端，然后將整合后的基因轉入細胞中或胚胎干細胞亦或受精卵中。

Flag-TST試劑盒試劑盒組分（20份）：

Flag-TST試劑盒產品優勢*輝駿生物

1. 既可用于TST和Flag雙標簽蛋白的串聯純化，又可用于TST或Flag單標簽蛋白的純化；

2. 抗體與樹脂偶聯，因此純化復合物中幾乎不含抗體污染，Western Blot或LC-MS檢測不受影響；

3. 串聯純化可以有效降低互作蛋白的假陽性率，使后續驗證更加簡單；

4. 親和材料經過特殊優化，與誘餌蛋白結合更多且結合力更強。

Flag TST試劑盒使用流程簡述

1. 將細胞裂解液與TST樹脂，室溫下孵育1-2小時，或4 ℃過夜。

2. 在室溫下，經過漂洗，洗脫得到洗脫液1。

3. 在洗脫液1中加入到Flag樹脂中，室溫孵育2-3小時，或4 ℃過夜。

4. 室溫下，漂洗，加洗脫緩沖液B得到最終洗脫產物。