cDNA克隆技术实验原理

基因调取和基因合成均是体外获取目标基因的方法。

基因调取：从细胞或组织中提取总DNA或总RNA后扩增出目的基因；该方法获得的基因是天然存在的，但由于个体差异，调取到的基因可能存在SNP，即调取到的序列与NCBI等数据库登录序列不完全一致。另外，当样本中目的基因含量较低时，可能调取不成功。

全基因合成：通过化学合成的方法获得目的DNA序列。该方法简单，快速，并且可以保证合成后的序列与您要求的序列完全一致，但当片段太长时，合成费用也相对较高。

cDNA克隆实验流程

1. 引物设计与合成

2. RNA提取和反转录

3. 以cDNA为模板，采用设计好的引物进行PCR，回收目的片段

4. 连接载体，转化大肠杆菌细胞，进行菌落PCR验证、酶切验证和测序

5. 测序结果分析和出具报告

基因调取/合成cDNA克隆服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

价格

基因调取、合成

目标基因序列
其他实验要求

1、基因载体质粒约3ug
2、基因载体甘油菌1ml
3、原始测序文件和拼接文件

4、实验报告（全基因合成无报告）

2-4周

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**基因调取/合成服务优势*辉骏生物**

十年服务经验，众多服务案例，服务成果得到优秀期刊认可

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基因调取/合成检测服务—客户文章

Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469.

【研究内容】：本研究利用基因表达/敲除、细胞功能检测，动物实验，双荧光素酶分析等实验，发现人黑色素瘤中TLR4的表达与STAT3的激活/磷酸化呈正相关，TLR4配体通过MYD88和TRIF激活黑色素瘤细胞中的STAT3，促进了肿瘤的生长。当抑制黑色素瘤中STAT3的功能时，TLR4激活产生的效应减弱，说明STAT3激活对TLR4信号介导的黑色素瘤发展至关重要，为黑色素瘤的病理生理学提供了新的线索。

使用技术：基因调取、载体构建

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Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究内容】：本研究通过基因过表达、双荧光素酶等实验发现LncRNA ILF3-AS1在颞叶癫痫（TLE）患者的海马和血清中水平升高，ILF3-AS1通过靶向miR-212诱导炎性细胞因子和MMP3、MMP9的表达。值得注意的是，针对ILF3-AS1/miR212/MMP3/9轴的治疗策略可能是治疗TLE的有效方法。

使用技术：载体构建实验、基因调取服务、cDNA克隆服务

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Rui Y.J. et al: Disruption of MDA5 mediated innate immune responses by the 3C proteins of Coxsackievirus A16, Coxsackievirus A6, and Enterovirus D68. J Virol. 2017, IF= 5.103.

【研究内容】：柯萨基病毒A16 (CV-A16)和A16 (CV-A6)，以及肠病毒D68 (EV-D68) 是手足口病（HFMD）和26种小儿呼吸道疾病的主要病因。作者通过基因表达、双荧光素酶和免疫共沉淀（Co-IP）等实验发现，这三种病毒的3Cpro蛋白可以与宿主的线粒体抗病毒信号蛋白竞争结合MDA5，从而抑制MDA5下游的RLR信号通路中关键因子I型干扰素（IFN）的产生；此外，它还能降解NF-κB信号通路中的关键因子TAK1而导致NF-κB失活。本研究揭示了这三种病毒破坏宿主先天免疫应答的新机制。

使用技术：基因调取及表达实验外包、载体构建技术

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