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輝駿生物的Flag-TST雙標簽免疫沉淀/免疫共沉淀試劑盒能夠高效完成單標簽或雙標簽融合蛋白的純化及其互作蛋白的調取。以雙標簽融合蛋白做TAP為例,將Flag標簽、TST標簽與目標蛋白在目的細胞中融合表達,分別采用TST樹脂和Flag樹脂進行兩步串聯的親和純化,最終獲得目標蛋白及其互作蛋白復合物。
FLAG-tag
是一段由8個氨基酸殘基組成,N-DYKDDDDK-C (1012
Da),其作用是標記蛋白。在蛋白表達和定位研究中,可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列連接起來,可以連接在目的蛋白的C端或N端,然后將整合后的基因轉入細胞中或胚胎干細胞亦或受精卵中。
TST標簽是strep-tagⅡ(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)的升級版,由兩個strep-tagⅡ外加連接臂組成,與融合蛋白結合能力更強,結合位點更多,其作用是標記蛋白。在蛋白表達和定位研究中,可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和TST-tag基因序列連接起來,可以連接在目的蛋白的C端或N端,然后將整合后的基因轉入細胞中或胚胎干細胞亦或受精卵中。
試劑名稱 | 體積 | 保存條件 |
TST樹脂 | 2mL | 4 ℃ |
Flag樹脂 | 1mL | -20 ℃ |
裂解緩沖液 | 3*50mL | 4 ℃ |
漂洗緩沖液A | 10mL | -20 ℃ |
洗脫緩沖液B | 1mL | -20 ℃ |
1、既可用于TST和Flag雙標簽蛋白的串聯純化,又可用于TST或Flag單標簽蛋白的純化;
2、抗體與樹脂偶聯,因此純化復合物中幾乎不含抗體污染,Western Blot或LC-MS檢測不受影響;
3、串聯純化可以有效降低互作蛋白的假陽性率,使后續驗證更加簡單;
4、親和材料經過特殊優化,與誘餌蛋白結合更多且結合力更強。
Flag TST試劑盒使用流程簡述
1. 將細胞裂解液與TST樹脂,室溫下孵育1-2小時,或4 ℃過夜。
2. 在室溫下,經過漂洗,洗脫得到洗脫液1。
3. 在洗脫液1中加入到Flag樹脂中,室溫孵育2-3小時,或4 ℃過夜。
4. 室溫下,漂洗,加洗脫緩沖液B得到最終洗脫產物。
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