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    當前位置:首頁 > 科研服務 > 分子/細胞生物學 > 細胞生物學 > miRNA靶基因驗證
    服務介紹

    熒光素酶 (Luciferase)報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統。雙熒光素酶報告基因系統指的是在同一細胞中同時表達兩種熒光素酶——螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,利用一個報告基因作為內參來校正另一個報告基因,從而減少細胞活性和轉染效率對實驗結果的影響。

    雙熒光素酶報告基因可用于檢測啟動子活性,或者轉錄因子和啟動子的結合。



     

    miRNA靶基因驗證技術原理


    miRNAs常與靶基因的非翻譯區(常為3’UTR)結合,從而抑制整個mRNA的翻譯。將待測的miRNA結合位點序列(靶基因3‘UTR全長或結合位點附近500bp序列)構建到熒光素酶基因的下游,將該質粒與miRNA mimics共轉染待測細胞;如果miRNA能夠結合待測序列,則會抑制上游熒光素酶表達,使熒光素酶底物發光減弱;根據化學發光值判斷miRNA是否與待測序列結合。

     



    miRNA靶基因驗證應用范圍


    1.miRNA與靶基因結合驗證

    2.ceRNA機制研究:當加入競爭性的lncRNA或circRNA時,可以通過觀察Luciferase活性的變化判斷mRNA-miRNA-LncRNA(或circRNA)三者是否存在ceRNA調控機制。

     



    miRNA靶基因驗證實驗技術流程

    熒光素酶載體構建
    細胞轉染

    熒光素酶檢測

    數據分析





    miRNA靶基因驗證技術服務*輝駿優勢


    化學發光法檢測,反應非常靈敏,可以有效的檢測體內微小的調控作用。

    操作簡便,檢測結果直觀。




    miRNA靶基因驗證服務信息


    項目名稱

    客戶提供

    結果交付

    實驗周期

    miRNA靶基因驗證細胞樣本
    實驗信息表(miRNA序列,3’UTR序列或靶點序列,細胞培養信息等)

     

    報告基因載體(野生和突變型)
    雙熒光素酶檢測結果
    實驗報告

    5-6周(不含細胞培養周期)
    ceRNA研究

    細胞樣本
    實驗信息表(miRNA序列,3’UTR序列或靶點序列,lncRNA或circRNA序列,細胞培養信息等)


     

    報告基因載體(野生和突變型)lncRNA或circRNA表達載體
    雙熒光素酶檢測結果
    實驗報告
    5-6周(不含細胞培養周期)



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    18927549347





    miRNA靶基因驗證實驗-客戶文章


    1637896170298984.png  Ma L. et al: miR-9, a MYC/MYCN-activated microRNA, regulates E-cadherin and cancer metastasis. Nat Cell Biol. 2010, IF=28.824

    【研究內容】:本研究發現miR-9在乳腺癌中上調,基因表達和雙熒光素酶實驗發現miR-9通過直接靶向編碼E-cadherin蛋白的mRNA“CDH1“來下調其表達,導致細胞運動性和侵襲性增加,進而激活β-catenin信號,導致VEGF表達的升高。同時,ChIP實驗發現MYC和MYCN可以結合miR-9-3在基因組中的位點從而激活miR-9。這些發現揭示了miR-9促進癌癥轉移的一個新的調控信號通路。

    使用技術:雙熒光素酶(Luc)實驗、基因過表達/干擾檢測、ChIP技術服務



    1637896170298984.png

      Sun YQ. et al: Long non-coding RNA HOTTIP promotes BCL-2 expression and induces chemoresistance in small cell lung cancer by sponging miR-216a.Cell Death Dis. 2018, IF= 8.469.

    【研究內容】:本研究發現一種lncRNA“HOTIP“與小細胞肺癌(SCLC)的化療敏感性、癌細胞增殖和患者不良預后有關。通過miRNA芯片和雙熒光素酶確定了HOTIP可以結合miR-216a,之后又采用雙熒光素酶檢測、RNA pull down MS和RIP等實驗,確定了他們三者間的ceRNA調控機制:HOTIP通過結合miR-216a來減輕其對抗凋亡因子BCL-2的抑制作用。這些成果闡述了HOTIP在小細胞肺癌進展中的新作用。

    使用技術:雙熒光素酶檢測服務、RNA pull down MS實驗




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