lncRNA與microRNA互作概述
lncRNA (Long non-coding RNA)即長鏈非編碼RNA，通常長度在200-100000 nt，具有5’帽子和3’polyA尾巴結構。
lncRNAs作用范圍廣泛，機制非常復雜，可以與DNA、RNA、蛋白質互作，參與表觀、轉錄、轉錄后等多個層面的調控，在生命活動中有重要作用。lncRNA與miRNA的結合是其重要的調控方式之一，lncRNA作為“miRNA海綿”，抑制miRNA與mRNA的結合，促進mRNA表達，該機制被稱為ceRNA調控機制。
lncRNA與microRNA互作服務信息
目前主要有兩類方法用于研究lncRNA與microRNA的互作，一是雙熒光素酶報告基因法，二是RNA pull down法。
| lncRNA與microRNA互作技術服務 |
技術類型
| 技術目標 | 技術原理 | 價格
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| 雙熒光素酶 | 驗證lncRNA與miRNA結合 | 將待測lncRNA序列構建到熒光素酶基因的下游，該質粒與miRNA mimics共轉染待測細胞；如果miRNA能夠結合lncRNA，則會抑制上游熒光素酶表達，使熒光素酶催化底物的光強減弱，根據化學發光值判斷miRNA是否與待測lncRNA結合 |
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| 雙熒光素酶 | 驗證ceRNA機制 | 將待測mRNA的3’UTR序列構建到熒光素酶基因的下游，該質粒與miRNA mimics、lncRNA表達載體共轉染待測細胞；與lncRNA空載對照組相比，當轉入lncRNA表達載體時，miRNA對靶基因3’UTR的調控減弱，說明三者間存在ceRNA調控 |
| 外源性RNA pull down | 驗證lncRNA與miRNA結合 | 體外轉錄帶有生物素標記的lncRNA，并與樣本裂解液孵育，之后利用鏈霉親和素磁珠捕獲體外條件下結合的靶RNA-蛋白質復合物，采用Western Blot或質譜技術確定復合物中的蛋白質 |
內源性RNA pull down
| 驗證lncRNA與miRNA結合 | 將自主研發的特異性RNA標簽與目標lncRNA構建融合表達載體，轉染細胞使其融合表達，通過與特異性RNA標簽結合的親和介質，將RNA標簽-lncRNA與miRNA的復合體純化出來，采用qPCR法檢測待測miRNA |
lncRNA與microRNA互作服務優勢
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十年服務經驗，眾多服務案例，服務成果得到優秀期刊認可
自有分子及細胞生物實驗平臺，能有效制定并執行最優的實驗路線
售后技術支持將一直保持到客戶發表文章，確?？蛻舭残倪M行下游實驗及投稿
lncRNA與microRNA互作研究案例
研究背景
肝細胞癌（HCC）極易發生轉移。TGF-β誘導的上皮-間充質轉化（EMT）在癌細胞擴散中的作用已被證實，但lncRNAs在TGF信號轉導中的作用仍不清楚。
研究路線
?對HCC細胞和TGF-β誘導HCC細胞的基因表達檢測發現lncRNA-ATB表達水平較高
?RIP、RNA pull down、雙熒光素酶和基因表達實驗證實對EMT和腫瘤侵襲有抑制作用的miR-200家族可結合lncRNA-ATB
?表達檢測和熒光素酶實驗表明lncRNA與ZEB1或ZEB2競爭結合miR-200s，三者存在ceRNA調控
?細胞實驗、肝組織檢測和小鼠模型實驗均表明lncRNA-ATB通過上述ceRNA作用誘導EMT并促進癌細胞侵襲
?RIP、RNA pull down等實驗篩選并確定了與lncRNA-ATB結合的mRNA“IL-11”
?細胞實驗、肝組織檢測和小鼠模型實驗均表明lncRNA-ATB以不依賴于miR-200s的方式促進IL-11 mRNA穩定性，進而激活STAT3信號，促進癌轉移
研究結論
TGF-β激活的lncRNA（lncRNA-ATB）在肝細胞癌（HCC）轉移中上調，并與不良預后相關。本研究從兩個方向揭示了lncRNA促進HCC轉移的機制：（1）lncRNA-ATB通過競爭性結合miR-200家族上調ZEB1和ZEB2，誘導EMT和侵襲；（2）lncRNA-ATB通過結合IL-11mRNA、自分泌誘導IL-11和觸發STAT3信號，促進癌細胞轉移到其它部位。
客戶文獻
Yuan J.H. et al: A Long Noncoding RNA Activated by TGF-b Promotes the Invasion-Metastasis Cascade in Hepatocellular Carcinoma. Cancer cell. 2014.
輝駿實力
實驗熱線：4006991663
